Tanto un termociclador de PCR en tiempo real de 48 pocillos como un termociclador de 96 pocillos pueden utilizarse para PCR de alto rendimiento. Se diferencian en cuanto a capacidad y método de detección. El termociclador de 48 pocillos permite la detección por fluorescencia durante la amplificación, mientras que el termociclador de 96 pocillos está diseñado para la amplificación convencional mediante programas de temperatura con gradiente. Sin embargo, el rendimiento útil también se ve influenciado por diversos parámetros externos, como el tipo de pocillos de control y de repetición, el tiempo de ejecución, la preparación de las muestras, la revisión de datos, el espacio disponible en la mesa de trabajo, el número de personal disponible y la posibilidad de recuperarse de ejecuciones fallidas.
Los laboratorios suelen necesitar comparar la capacidad de muestras utilizables, el método de detección, el tamaño del lote, el espacio de trabajo y el costo por resultado válido, en lugar de basarse únicamente en el número de pocillos. Esto es especialmente importante cuando se consideran tanto un sistema compacto de PCR en tiempo real como un termociclador de mayor tamaño.
ARI Médicos Sistema de PCR en tiempo real AR-48E/48R y Ciclador térmico de PCR AR-96T proporcionar una solución prácticaariEl hijo se encuentra entre la detección compacta en tiempo real y el ciclo de gradiente convencional más grande. Sus canales ópticos, capacidad de gradiente, almacenamiento, recuperación de ejecución, dimensiones y requisitos de flujo de trabajo hacen que la elección entre PCR en tiempo real y ciclo térmico convencional sea más útil que un recuento de pozos.arihijo solo.
Comparación de PCR en tiempo real de 48 pocillos con termociclador de 96 pocillosarimesa hijo
Para los compradores que fabrican un instrumento PCR compariHijo, la tabla compara los dos instrumentos por capacidad, detección, flujo de trabajo, factores de costo y posible adecuación al laboratorio, en lugar de tratar el número de pozos como la única diferencia.
No considere ambos instrumentos como equivalentes.
Los dos instrumentos no deben compararse únicamente por el número de pozos, ya que uno incluye detección de fluorescencia en tiempo real, mientras que el otro se centra en la amplificación convencional.
Comparar la ruta del ensayo
Extracción de mapas, controles, amplificación, detección, elaboración de informes y procesamiento repetido antes de decidir que un mayor número de pozos es automáticamente mejor.
| Factor | PCR en tiempo real de 48 pocillos | Termociclador de 96 pocillos |
|---|---|---|
| Capacidad típica | 48 posiciones antes de controles y repeticiones | 96 posiciones antes de controles y repeticiones |
| Tipo de deteccion | Detección de fluorescencia durante la amplificación | Amplificación sin detección de fluorescencia en tiempo real |
| Mejor ajuste | Laboratorios pequeños y medianos, laboratorios móviles, qPCR de rutina | Lotes más grandes y configuración de PCR convencional |
| Enfoque del flujo de trabajo | Canales, archivos de datos, informes, análisis CT | Optimización de gradientes, plantillas, ciclo de lotes |
| Factor de costo | Canales, software, ensayos, flujo de trabajo de datos | Tamaño del lote, consumibles, planificación de la ejecución |
| ARI Ejemplo médico | AR-48E/48R | AR-96T |
¿Cuántas muestras puede procesar una máquina de PCR de 48 o 96 pocillos?
Una máquina de PCR de 48 pocillos no necesitaariGeneralmente se procesan 48 muestras por corrida, y una máquina de 96 pocillos no siempre procesa 96. Los controles, estándares, repeticiones y pocillos reservados reducen la capacidad de muestras utilizables. Un cálculo realista es: muestras utilizables por corrida = total de pocillos menos controles, pocillos de calibración, pocillos de repetición y pocillos fallidos o reservados. Si una corrida de 48 pocillos usa 4 controles y 4 posiciones de repetición, el número de muestras utilizables es 40. Si una corrida de 96 pocillos usa 8 controles y 8 posiciones de repetición, el número de muestras utilizables es 80. Estas cifras son solo ilustrativas. Los controles, estándares, duplicados, pocillos reservados y posiciones de repetición reales dependen del protocolo del ensayo.
Comience con pozos utilizables
Los controles, los estándares, las muestras duplicadas y las repeticiones reducen la cantidad de muestras de pacientes que pueden entrar en una placa nominalmente llena.
Rendimiento diario útil de PCR = Muestras utilizables por ejecución × Ejecuciones completadas por día. Las ejecuciones completadas deben incluir la preparación, la carga, la amplificación, la detección, la revisión de resultados, la limpieza y el tiempo de cambio de formato. Una máquina más pequeña utilizada en lotes completos a veces puede tener un perfil de costos más favorable que una máquina más grande con muchos puestos inactivos, por lo que el rendimiento de la máquina de PCR debe modelarse con la jornada laboral real del laboratorio.
Por ejemplo, si un laboratorio normalmente necesita unos 30 resultados utilizables en un lote de qPCR, una placa de 96 pocillos parcialmente llena puede ofrecer poca ventaja práctica cuando el ensayo aún requiere detección de fluorescencia en tiempo real. En ese flujo de trabajo, una máquina de PCR en tiempo real de 48 pocillos podría ser más adecuada. Si los lotes de PCR convencionales se aproximan regularmente a los 80 pocillos utilizables y la detección posterior ya está establecida, un termociclador de PCR de 96 pocillos puede utilizar la capacidad disponible de forma más eficaz. Este es un escenario de compra ilustrativo.ario; la capacidad real depende del protocolo de ensayo.
Sistema de PCR en tiempo real frente a termociclador convencional: ¿Cuál necesita su laboratorio?
Elija un sistema de PCR en tiempo real cuando el laboratorio necesite valores de Ct, curvas de amplificación, curvas de fusión, genotipado, cuantificación relativa o informes basados en fluorescencia. Elija un termociclador convencional cuando la necesidad principal sea la amplificación por PCR convencional, la optimización del gradiente y la configuración de lotes de rutina más grandes sin detección en tiempo real. Esta elección entre PCR en tiempo real y termociclado convencional debe hacerse antes de la computación.aring el número de pozos.
¿Cuándo debería un laboratorio elegir un sistema de PCR en tiempo real de 48 pocillos?
Un sistema de PCR en tiempo real de 48 pocillos resulta útil cuando el laboratorio necesita detección de fluorescencia, valores Ct, curvas de amplificación, curvas de fusión, genotipado o flujos de trabajo de PCR cuantitativa (qPCR) rutinarios en lotes pequeños. El sistema de PCR en tiempo real AR-48E/48R utiliza un formato de 48 pocillos. El AR-48E ofrece cuatro canales de fluorescencia, mientras que el AR-48R ofrece dos.
Cuando se necesita detección en tiempo real
Elija una plataforma en tiempo real cuando el ensayo requiera monitorización de la fluorescencia y resultados cuantitativos o cualitativos durante el proceso de amplificación.
ARI El equipo médico cuenta con una pantalla táctil de 7 pulgadas para funcionamiento autónomo, almacenamiento para más de 1,000 archivos de datos experimentales, importación y exportación por USB, escaneo de fluorescencia en dos segundos para 48 pocillos y recuperación automática de experimentos tras una interrupción del suministro eléctrico. Estas características son importantes para laboratorios pequeños y medianos que no pueden depender de un ordenador independiente para cada experimento.
¿Cómo afectan los canales de fluorescencia a la selección en la PCR en tiempo real?
Los canales de fluorescencia solo son relevantes si los ensayos los utilizan. Un sistema de dos canales en tiempo real puede satisfacer necesidades de detección más sencillas. Un sistema de cuatro canales admite una mayor variedad de combinaciones de colorantes y análisis multiplex si los ensayos del laboratorio lo requieren. Antes de adquirir canales adicionales, los compradores deben especificar los ensayos actuales y planificados, los fluoróforos, los controles, las necesidades de generación de informes y los modos de análisis del software.
¿Cuándo debería un laboratorio elegir un termociclador de 96 pocillos?
Un termociclador de PCR de 96 pocillos es ideal cuando el flujo de trabajo requiere lotes de PCR convencionales de mayor tamaño, configuración repetida de protocolos u optimización de gradientes, en lugar de detección de fluorescencia en tiempo real. El termociclador AR-96T admite placas de 96 pocillos y hasta 12 gradientes en una sola ejecución, lo que ayuda a los equipos a optimizar las condiciones de hibridación en todo un lote.
Cuando el ciclo de temperatura es la tarea
Un termociclador de 96 pocillos es adecuado para los flujos de trabajo de preparación de PCR en los que la detección posterior se realiza por separado.
En su página oficial se indica que cuenta con una pantalla táctil de 7 pulgadas, más de 1,000 programas almacenados, plantillas de experimentos preinstaladas, almacenamiento USB, recuperación automática tras un fallo eléctrico y conductos de ventilación delanteros y traseros para poder colocar varias unidades en paralelo. Esto último es importante cuando un laboratorio planea instalar varios instrumentos en una misma sala.
¿Qué es lo más importante en un termociclador convencional?
Para la PCR convencional, los canales de fluorescencia no son el principal problema. La uniformidad de la temperatura, el rango del gradiente, el comportamiento de la tapa calefactada, el almacenamiento del programa, los consumibles compatibles y la recuperación de la ejecución son más relevantes. Por eso, el laboratorio debería decidir entre la PCR en tiempo real y el ciclo térmico convencional antes de realizar cualquier prueba.aring pozo contar solo.
¿Cuánto espacio de mesa necesita una máquina de PCR?
ARI Medical enumera ambos modelos de PCR con unas dimensiones de 260 x 400 x 260 mm y un peso de 11 kg. El espacio de la mesa de trabajo es una parte cuantificable del flujo de trabajo de la PCR. Verifique el espacio libre para la ventilación, la fuente de alimentación, el acceso del operador, el espacio para la carga de placas, el flujo de trabajo de extracción cercano y si se pueden colocar varios instrumentos juntos sin bloquear los conductos de aire o el acceso de servicio. Revise ARI Médicos perfil de la empresa, soluciones de laboratorio, y recursos de servicio a la hora de planificar la instalación, la formación y el soporte a largo plazo.
Cuente el equipo de apoyo
La planificación del laboratorio incluye herramientas de extracción, pipetas, almacenamiento en frío, un ordenador, consumibles y espacio para el trabajo de limpieza y post-amplificación, no solo el espacio que ocupa el instrumento.
Valora un resultado válido
Incluya controles, reactivos, consumibles, tasas de repetición, mano de obra, mantenimiento y tiempo de inactividad cuando se compariCosto por resultado.
El costo por muestra debe calcularse a partir de los pozos utilizables, no del total. Se deben añadir los consumibles, los controles, las repeticiones, el tiempo del operador, la verificación, la instalación, la capacitación, el mantenimiento preventivo, el software o el procesamiento de datos y el tiempo de inactividad. La recuperación ante un fallo eléctrico puede proteger el tiempo y los reactivos, por lo que el comportamiento de la recuperación debe formar parte del análisis de costos. También conviene comparar el lote práctico más pequeño, ya que una corrida de 96 pozos parcialmente cargada puede costar más por muestra válida que una corrida completa de 48 pozos.
Conclusión
Cuando compariSi utiliza un sistema de PCR en tiempo real con un termociclador convencional, elija una máquina de PCR en tiempo real de 48 pocillos cuando la detección de fluorescencia y un flujo de trabajo rutinario compacto sean la prioridad. Elija un termociclador convencional de 96 pocillos cuando los lotes convencionales más grandes y la optimización del gradiente sean más importantes. Adapte la compra a las muestras utilizables, las necesidades del ensayo, los canales, el espacio de la mesa de trabajo, el rendimiento diario de la máquina de PCR y el costo por ejecución. conmigo ARI Médical Scientific con los tamaños de lote y los requisitos del protocolo.
Preguntas Frecuentes
¿Cuál es la principal diferencia entre las máquinas de PCR de 48 pocillos y las de 96 pocillos?
En esta competiciónariHijo, el modelo de 48 pocillos proporciona detección de fluorescencia en tiempo real, mientras que el modelo de 96 pocillos es un termociclador de gradiente convencional diseñado para lotes de amplificación más grandes sin medición de fluorescencia en tiempo real.
¿Cómo calculo las muestras de PCR utilizables por corrida?
Reste los pozos de control, los pozos de calibración, los pozos de repetición y las posiciones reservadas del recuento total de pozos.
¿La PCR en tiempo real es lo mismo que un termociclador?
Un instrumento de PCR en tiempo real es un termociclador equipado con detección de fluorescencia óptica. Un termociclador convencional controla las temperaturas de amplificación sin monitorizar la fluorescencia en tiempo real.
¿Cuántos canales de fluorescencia necesita una máquina de PCR?
El número adecuado depende de los colorantes del ensayo, los planes de multiplexación, las necesidades de elaboración de informes y si las pruebas futuras requieren más canales.
¿Qué ocurre si se produce un corte de energía durante una prueba de PCR?
Algunos sistemas ofrecen recuperación automática de los experimentos tras una interrupción del suministro eléctrico, pero los compradores deben verificar el comportamiento exacto de la recuperación para el modelo elegido.
¿Qué termociclador de PCR debería comprar para mi laboratorio?
Elija un termociclador de PCR en tiempo real cuando el flujo de trabajo requiera detección de fluorescencia, valores Ct, curvas de amplificación, curvas de fusión, genotipado o PCR cuantitativa. Para flujos de trabajo cuantitativos, esta es la categoría de termocicladores de qPCR. Elija un termociclador de PCR de 96 pocillos cuando la principal necesidad sea la amplificación convencional, la optimización del gradiente y lotes grandes sin detección de fluorescencia en tiempo real. Luego, compare las muestras utilizables por corrida, el tamaño del lote, el espacio de trabajo y el costo por resultado válido.